我要投搞

标签云

收藏小站

爱尚经典语录、名言、句子、散文、日志、唯美图片

当前位置:2019全年特准特马资料 > 泽兰 >

在测定酶活力时为什么对试剂配置、实际用量、血清用量、温度、PH

归档日期:09-19       文本归类:泽兰      文章编辑:爱尚语录

  可选中1个或多个下面的关键词,搜索相关资料。也可直接点“搜索资料”搜索整个问题。

  几乎所有植物中都存在淀粉酶,尤其是萌发的禾谷类种子,淀粉酶活性最强。主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。种子萌发时,淀粉酶活性随萌发时间迅速增加,将淀粉分解成小分子糖类,供幼苗生长。α-淀粉酶随机水解淀粉的α-1,4-糖苷键,作为淀粉分解的起始酶而起主要作用;其水解产物为麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原性糖;β-淀粉酶水解非还原端的第二个α-1,4-糖苷键,水解产物为麦芽糖,并能使一部分糊精糖化。本实验以萌发种子为材料,测定其中α-淀粉酶和β-淀粉酶活性的差异。

  两种淀粉酶具有不同理化特性,α-淀粉酶不耐酸,在PH3?6以下迅速钝化;β-淀粉酶不耐热,在70℃下15Min则被钝化。据此,在测定时钝化其中之一,就可以测定出另一种酶的活力,本实验采用加热钝化β-淀粉酶测出α-淀粉酶活力,再与非钝化条件下测得的总淀粉酶活力比较,求出β-淀粉酶活力。淀粉的水解产物麦芽糖及其他还原性糖能与3,5-二硝基水杨酸试剂反应,使其还原生成红色3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内,其颜色深浅与淀粉酶水解产物的浓度成正比,可用麦芽糖(或葡萄糖)浓度表示,用比色法测定淀粉生成的还原糖的量,以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。

  分光光度计;离心机;恒温水浴器;研钵;具塞刻度试管25Ml 13支,刻度吸管1ml、2ml、5Ml各1支;容量瓶50Ml 2支。

  麦芽糖标准液(1Mg/Ml):称取100Mg麦芽糖,用蒸馏水溶解并定容至100Ml。

  DNS试剂(3,5-二硝基水杨酸):精确称取3,5-二硝基水杨酸1g,溶于20Ml 12Mol/L NAOH溶液中,加入50Ml蒸馏水,再加入30g酒石酸钾钠,待溶解后用蒸馏水定容至100Ml。盖紧瓶塞,勿使CO2进入。若溶液混浊,可过滤后使用。

  0?1Mol/L PH5?6的柠檬酸缓冲液:A液(0?1Mol/L柠檬酸):称取分析纯柠檬酸21?01g,用蒸馏水溶解并定容至1L;B液(0?1Mol/L柠檬酸钠):称取柠檬酸钠29?41g用蒸馏水溶解并定容至1L;取A液55Ml与B液145Ml混匀,即为0?1Mol/L PH5?6的柠檬酸缓冲液。

  1.酶液提取称取25℃下萌发3~4天的小麦种子1?0g(芽长1?0~1?5CM),置研钵中,加少量石英砂和2Ml蒸馏水,研磨成匀浆后转入离心管中,用7Ml蒸馏水分次将残渣洗入离心管,提取液在室温下放置提取15~20Min,每隔数分钟搅动1次,使其充分提取。然后在3000r/Min转速下离心10Min,将上清液倒入50Ml容量瓶中,加蒸馏水定容至刻度,摇匀,即为淀粉酶原液。吸取上述淀粉酶原液5Ml,放入50Ml容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度摇匀,即为淀粉酶稀释液。

  表18-1制作麦芽糖标准曲线蒸馏水(ml)2.01.81.61.20.80.40麦芽糖含量(mg)00.20.40.81.21.62.03,5-二硝基水杨酸(ml)2222222摇匀,置沸水浴中煮沸5Min。取出后流水冷却,加蒸馏水定容至20Ml。以1号管作为空白调零点,在540nM波长下比色测定。以麦芽糖含量为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线支干净的具塞刻度试管,编号,按表18-2进行操作。

  4?结果计算 用Ⅰ-2、Ⅰ-3吸光度平均值与Ⅰ-1吸光度值之差,在标准曲线上查出相应的麦芽糖含量(Mg),再按下式计算α-淀粉酶的活力(Aα),淀粉酶活性以每克鲜重所含麦芽糖毫克数(Mg/g·Min)表示:

  Ⅱ-2、Ⅱ-3吸光度平均值与Ⅱ-1吸光度值之差,在标准曲线上查出相应的麦芽糖含量(Mg),按式18-1计算(α+β)-淀粉酶的活性AT?

  式中A:淀粉酶活性,Aα为α-淀粉酶的活性,AT为淀粉酶总活性,主要是α、β-淀粉酶的活性;

  VT:样品稀释液总体积(α-淀粉酶为50Ml,α+β淀粉酶为500Ml);

  1.萌发种子和干种子α-淀粉酶和β-淀粉酶活力有何差异?这种变化有何生物学意义?

本文链接:http://unepoesie.com/zelan/1959.html